БРУСНИКИ ЛИСТЬЯ
Vaccinii vitis-idaeae folia
COWBERRY LEAF*

ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные до начала цветения или после созревания плодов высушенные листья многолетнего вечнозеленого кустарничка Vaccinium vitis-idaea L. Содержат не менее 4,0 % производных гидрохинона в пересчете на арбутин (С₁₂Н₁₆О₇; М.м. 272,3) в сухом сырье или не менее 4,5 % арбутина (С₁₂Н₁₆О₇; М.м. 272,3) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Листья короткочерешковые, кожистые, эллиптические или обратнояйцевидные, на верхушке притупленные или слабовыемчатые с цельными или слегка зазубренными, завернутыми вниз краями, длиной от 7 мм до 30 мм, шириной от 5 мм до 15 мм. Листья сверху темно-зеленые, снизу светлозеленые с ясно заметными темно-коричневыми точками (железками). Запах отсутствует.

B. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании листа с поверхности видны слегка извилистые стенки клеток верхнего и нижнего эпидермиса. Устьица только на нижнем эпидермисе, мелкие, окружены двумя околоустьичными клетками, расположенными параллельно устьичной щели (парацитный тип). На нижней стороне листа имеются железки, состоящие из многоклеточной ножки, постепенно переходящей в овальную многоклеточную головку с коричневым содержимым. На верхней стороне листа по жилкам встречаются редкие одноклеточные прямые или дуговидно изогнутые волоски с толстыми стенками и гладкой или слабобородавчатой поверхностью. В мезофилле содержатся редкие одиночные кристаллы оксалата кальция в виде призм.

С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченного сырья (355) прибавляют 5 мл смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и кипятят с обратным холодильником в водяной бане в течение 10 мин. Горячее извлечение фильтруют. Фильтр и пробирку промывают смесью из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 5 мл этим же растворителем.
Раствор сравнения. 2,5 мг арбутина Р растворяют в 5 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля G Р.
Подвижная фаза: этилацетат Р — кислота муравьиная безводная Р — вода Р (44:3:3, об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л 4-аминопиразолона Р, затем раствором 20 г/л калия ферроцианида Р и проявляют в парах аммиака. Просматривают при дневном свете.
Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора в верхней половине могут обнаруживаться и другие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: листья, побуревшие и почерневшие с обеих сторон, — не более 7 %; другие части растения — не более 1 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.
Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 13,0 %. 3,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.
Общая зола (2.4.1.6). Не более 7,0 %.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 0,5 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Определение содержания производных гидрохинона в пересчете на арбутин. К 0,400 г измельченного сырья (355) прибавляют 50 мл воды Р и нагревают на водяной бане в течение 30 мин. Охлаждают и доводят водой Р до объема 250,0 мл. После оседания частиц сырья 5,0 мл извлечения переносят в делительную воронку, прибавляют 45 мл воды Р, 1 мл раствора 20 г/л аминопиразолона Р, 0,5 мл раствора аммиака разведенного Р2, 1 мл раствора 80 г/л калия ферроцианида Р. После прибавления каждого ингредиента смесь перемешивают. Выдерживают в течение 5 мин, прибавляют 25 мл хлороформа Р и встряхивают. Органический слой процеживают в мерную колбу вместимостью 100 мл через ватный тампон, увлажненный хлороформом Р. Водный слой промывают хлороформом Р три раза порциями по 25 мл. Хлороформные извлечения объединяют и доводят хлороформом Р до объема 100,0 мл.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученного раствора при 455 нм, используя воду Р в качестве компенсационного раствора.
Содержание производных гидрохинона в пересчете на арбутин в процентах рассчитывают по формуле:

где:
648 — удельный показатель поглощения арбутина;
А — оптическая плотность полученного раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания арбутина.
0,500 г измельченного сырья (710) помещают в колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл воды Р и нагревают, поддерживая слабое кипение, в течение 30 мин. Горячее извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, избегая попадания частиц сырья на фильтр. В колбу с сырьем повторно прибавляют 25 мл воды Р и кипятят в течение 20 мин. Горячее извлечение вместе с сырьем переносят на тот же фильтр и остаток на фильтре дважды промывают горячей водой Р порциями по 10 мл. К фильтрату прибавляют 3 мл раствора свинца (II) ацетата основного Р, перемешивают, охлаждают и доводят объем фильтрата водой Р до 100,0 мл. Колбу помещают в водяную баню и выдерживают до полной коагуляции осадка. Горячую жидкость полностью отфильтровывают в колбу через бумажный фильтр, прикрывая воронку часовым стеклом. Охлаждают, к фильтрату прибавляют 1 мл кислоты серной Р, колбу взвешивают с точностью до 0,01 г и кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч, поддерживая равномерное и слабое кипение. Охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной водой Р и полностью отфильтровывают в колбу вместимостью 250 мл через бумажный фильтр. К фильтрату прибавляют 0,1 г порошка цинка Р и встряхивают в течение 5 мин. Жидкость нейтрализуют натрия гидрокарбонатом Р (около 1—2 г) по красной лакмусовой бумаге Р, прибавляют еще 2 г натрия гидрокарбоната Р и после его растворения фильтруют в колбу через бумажный фильтр.
50,0 мл фильтрата переносят в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл воды Р и немедленно титруют из микро- или полумикробюретки 0,1 М раствором йода до появления синего окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин, используя в качестве индикатора раствор крахмала, свободный от йодидов, Р.
1 мл 0,1 М раствора йода соответствует 0,01361 г арбутина (С₁₂Н₁₆О₇).

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.