БУЗИНЫ ЧЕРНОЙ ЦВЕТКИ
Sambuci nigrae flores
ELDER FLOWER
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные в период цветения высушенные цветки и бутоны кустарника Sambucus nigra L. Содержат не менее 0,80% флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид (С₂₁Н₂₀О₁₂; М.м. 464,4) в сухом сырье или не менее 2,0% флавоноидов в пересчете на рутин (С₂₇Н₃₀О₁₆; М.м. 611) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Отдельные цветки и бутоны на коротких голых цветоножках или без них. Цветки со слабо заметной пятизубчатой спайнолистной чашечкой и венчиком из 4—5 лепестков, сросшихся у основания, диаметром до 5 мм. Тычинок пять, приросших к трубке венчика, завязь полунижняя, трехгнездная. Цвет желтоватый. Запах ароматный.

B. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании лепестка с поверхности видны многоугольные со слабо извилистыми тонкими стенками клетки верхнего эпидермиса, по краю — с сосочковидными выростами; клетки нижнего эпидермиса более крупные, сильно извилистые. Устьица только на нижней стороне лепестка, овальные, аномоцитного типа. Кутикула с обеих сторон, морщинистая. Клетки эпидермиса чашелистика со слабо извилистыми стенками, устьица округлые, кутикула мелкоморщинистая. В мезофилле лепестков и чашелистиков многочисленные тонкостенные клетки-идиобласты с кристаллическим песком оксалата кальция. Волоски простые и головчатые. Простые волоски сосочковидные, мелкие, одноклеточные, тонкостенные, со штриховатой кутикулой. Головчатые волоски крупные, с округлой или овальной многоклеточной головкой на 2—4-клеточной ножке. Пыльцевые зерна мелкие сферические или эллипсоидные, диаметром около 30 мкм, с тремя апертурами, расположенными по экватору.

(ЕФ) С. Просматривают в ультрафиолетовом свете при 365 нм хроматограммы, полученные в испытании «Sambucus ebulus L.». На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются интенсивная флуоресцирующая зона светло-синего цвета (хлорогеновая кислота), флуоресцирующая зона оранжевого цвета (рутин) и флуоресцирующая зона оранжевого цвета (изокверцитрозид), расположенная немного выше зоны гиперозида на хроматограмме раствора сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживается флуоресцирующая зона зеленовато-синего цвета, расположенная немного ниже зоны кофейной кислоты на хроматограмме раствора сравнения; могут обнаруживаться и другие слабые флуоресцирующие зоны. При просматривании при дневном свете на хроматограмме испытуемого раствора четко видны только зоны, соответствующие рутину и изокверцитрозиду.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
(ЕФ) Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения побуревшие цветки — не более 15%. Цветоносы и другие посторонние примеси не более 8%. Определение проводят из 10 г испытуемого сырья.

(ЕФ) Sambucus ebulus L. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р, нагревают на водяной бане при температуре 65°С в течение 5 мин при периодическом встряхивании. Охлаждают, фильтруют и доводят до объема 10 мл.
Раствор сравнения. 1 мг кофейной кислоты Р, 1 мг хлорогеновой кислоты Р, 2,5 мг гиперозида Р и 2,5 мг рутина Р растворяют в 10 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: горячую пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 гл макрогола 400 Р в метаноле Р. Через 30 мин пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты на хроматограмме раствора сравнения в нижней половине обнаруживаются, в порядке увеличения значения R_f, флуоресцирующая зона оранжевого цвета (рутин), флуоресцирующая зона светло-синего цвета (хлорогеновая кислота) и флуоресцирующая зона от оранжево-желтого до оранжево-коричневого цвета (гиперозид); в верхней трети обнаруживается флуоресцирующая зона зеленовато-синего цвета (кофейная кислота). На хроматограмме испытуемого раствора не должна обнаруживаться зона розового цвета, расположенная ниже зоны рутина на хроматограмме раствора сравнения.

(ЕФ) Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 10,0%. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°С до 105°С в течение 2 ч.

(ЕФ) Общая зола (2.4.16). Не более 10,0%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 3,0%.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(ЕФ) Определение содержания флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид. 0,600 г измельченного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл раствора 5 гл гексаметилентетрамина Р, 20 мл ацетона Р и 2 мл кислоты хлористоводородной Р1. Кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего извлечение процеживают через ватный тампон в колбу. Ватный тампон помещают в круглодонную колбу с остатком сырья и дважды кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин, каждый раз прибавляя 20 мл ацетона Р в качестве экстрагента. Охлаждают и процеживают через ватный тампон. Объединенные ацетоновые извлечения фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, ополаскивают круглодонную колбу ацетоном Р и фильтруют через тот же фильтр, после чего промывают фильтр ацетоном Р. Объем раствора доводят до 100,0 мл ацетоном Р. 20,0 мл полученного раствора помещают в делительную воронку, прибавляют 20 мл воды Р и экстрагируют этилацетатом Р порцией 15 мл, затем еще трижды порциями по 10 мл. Этилацетатные извлечения объединяют, помещают в делительную воронку и дважды промывают водой Р порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через бумажный фильтр с 10 г натрия сульфата безводного Р в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят этилацетатом Р до объема 50,0 мл (раствор А).
Испытуемый раствор. К 10,0 мл раствора А прибавляют 1 мл реактива алюминия хлорида Р и доводят 5% (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема 25,0 мл.
Компенсационный раствор. 10,0 мл раствора А доводят 5% (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема 25,0 мл.
Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 425 нм.
Содержание флавоноидов в пересчете на изокверцитрозид в процентах рассчитывают по формуле:

где
500 — удельный показатель поглощения изокверцитрозида;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин. 1,000 г измельченного сырья (710) помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл спирта (70%, об/об) Р, взвешивают с точностью до 0,01 г и нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц со стенок колбы. Охлаждают до комнатной температуры, доводят массу колбы до первоначальной спиртом (70%, об/об) Р и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
Испытуемый раствор. К 2,0 мл раствора А прибавляют 15 мл 96% спирта Р, 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р, 3 мл раствора 50 г/л алюминия хлорида Р в спирте (70%, об/об) Р, 2 мл раствора 50 г/л гексаметилентетрамина Р и доводят водой Р до объема 25,0 мл.
Компенсационный раствор. К 2,0 мл раствора А прибавляют 15 мл 96% спирта Р, 0,5 мл кислоты уксусной разведенной Р, 2 мл раствора 50 гл гексаметилентетрамина Р и доводят водой Р до объема 25,0 мл.
Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 407 нм.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах рассчитывают по формуле:

где
220 — удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.