ГИНКГО ЛИСТЬЯ
Ginkgo folia
GINKGO LEAF

ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Высушенные цельные или частично измельченные листья Ginkgo biloba L. Содержат не менее 0,5 % флавоноидов в пересчете на флавоновые гликозиды в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Цельные листья шириной от 4 см до 10 см, веерообразные, обычно двулопастные, иногда неразделенные. Черешки листьев длиной от 4 см до 9 см. Верхняя сторона листьев немного темнее нижней. Обе поверхности гладкие, жилкование дихотомическое. Жилки расходятся по радиусу от основания, они одинаково заметны с обеих сторон листа. Дистальная часть листовой пластинки имеет в различной степени неровный край, латеральная часть листовой пластинки цельнокрайняя, постепенно сужающаяся к основанию. Цвет сероватый, желтовато-зеленый или желтовато-коричневый.

B. Микроскопия (#2.8.3). Исследуют измельченное сырье (355). Цвет сероватый, желтовато-зеленый или желтовато-коричневый. Верхняя эпидерма состоит из удлиненных клеток с неравномерно утолщенными стенками. Клетки нижней эпидермы мельче, каждая клетка имеет кутикулу и короткий волосок. Видны: устьица размером около 60 мкм, крупные, глубоко погруженные, с 6—8 околоустьичными клетками, более многочисленные на нижней эпидерме; в мезофилле многочисленные группы кристаллов оксалата кальция различного размера; фрагменты проводящей ткани черешка и жилок листа.

C. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 2,0 г измельченного сырья (710) прибавляют 10 мл метанола Р. Нагревают в водяной бане при температуре 65°С в течение 10 мин, при перемешивании. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют.
Раствор сравнения. 1,0 мг хлорогеновой кислоты Р и 3,0 мг рутина Р растворяют в 20 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — кислота уксусная ледяная Р — вода Р — этилацетат Р (7,5:7,5:17,5:67,5, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 20 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 17 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: горячую пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 30 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и более слабые флуоресцирующие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: побеги — не более 5 %. Другие допустимые примеси: не более 2 %.
Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 11,0 %. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°С до 105°С в течение 2 ч.
Общая зола (2.4.16). Не более 11,0 %.


КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Жидкостная хроматография (2.2.29).
Испытуемый раствор. К 2,500 г измельченного сырья (710) прибавляют 50 мл 60 % (об/об) раствора ацетона Р, нагревают с обратным холодильником в течение 30 мин. Фильтруют, повторяют экстракцию с 40 мл 60 % (об/об) раствора ацетона Р. Экстракты объединяют и разводят до объема 100,0 мл 60 % (об/об) раствором ацетона Р. 50,0 мл экстракта упаривают до удаления ацетона, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл с помощью 30 мл метанола Р. Прибавляют 4,4 мл кислоты хлористоводородной Р1, доводят водой Р до объема 50,0 мл и центрифугируют. 10 мл надосадочной жидкости помещают во флакон из темного стекла вместимостью 10 мл, укупоривают резиновой пробкой с алюминиевым колпачком под обкатку и нагревают на водяной бане в течение 25 мин. Охлаждают до комнатной температуры.
Раствор сравнения. 10,0 мг кверцетина дигидрата Р растворяют в 20 мл метанола Р. Прибавляют 15,0 мл кислоты хлористоводородной разведенной Р и 5 мл воды Р и доводят метанолом Р до объема 50,0 мл.
Условия хроматографирования:
- колонка длиной 0,125 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- температура: 25°С;
- подвижная фаза:
- подвижная фаза А: раствор 0,3 г/л кислоты фосфорной Р, доведенный до рН 2,0.
- подвижная фаза В: метанол Р.

- скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;
- спектрофотометрический детектор, длина волны 370 нм;
- объем вводимой пробы: 10 мкл.
Относительные времена удерживания (по отношению к кверцетину; время удерживания около 12,5 мин): кемпферол — около 1,4; изорамнетин — около 1,5.
Пригодность хроматографической системы:
- разрешение между пиками кемпферола и изорамнетина не менее 1,5.
Пики, элюируемые до пика кверцетина и после пика изорамнетина, на хроматограмме испытуемого раствора не учитывают.
Содержание флавоноидов в пересчете на флавоновые гликозиды в процентах рассчитывают по формуле:

где:
S₁ — сумма площадей всех учитываемых пи-ков на хроматограмме испытуемого раствора;
S₂ — площадь пика кверцетина на хромато-грамме раствора сравнения;
m₁ — масса навески кверцетина дигидрата Р в растворе сравнения, г;
m₂ — масса навески испытуемого сырья, г;
Р — содержание безводного кверцетина в кверцетина дигидрате Р, %.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.