ЭЛЕУТЕРОКОККА КОРНЕВИЩА И КОРНИ
Eleutherococci rhizomata et radices
ELEUTHEROCOCCUS
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные осенью, тщательно очищенные от земли, разрубленные на куски и высушенные корневища и корни кустарника Eleutherococcus senticosus (Rupr. et Maxim.) Maxim. Содержат не менее 0,08 % суммы элеутерозида В (М.м. 372,4) и элеутерозида Е (М.м. 742,7) или не менее 0,30 % суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
А. Внешние признаки (#2.8.3). Куски корневищ и корней, цельные или расщепленные вдоль, длиной до 8 см, толщиной до 4 см, деревянистые, твердые, прямые или изогнутые, иногда разветвленные. Кора тонкая, плотно прилегает к древесине. Корневища с поверхности гладкие или слабо продольно-морщинистые с пазушными почками и следами отмерших стеблей и обломанных корней. Поверхность корней более гладкая со светлыми поперечными бугорками. Излом длинноволокнистый, светло-желтого цвета. Корневища с поверхности светло-коричневого цвета, корни — более темные. Запах слабый.

В. Микроскопия (#2.8.3). На поперечном срезе корневищ и корней видны: секреторные ходы с 4-5 эпителиальными клетками, заполненные коричневым содержимым; лубяные волокна с толстыми одревесневшими стенками, располагаются группами или одиночно; в клетках лубяной паренхимы многочисленные друзы оксалата кальция. Крахмал заполняет только клетки паренхимы, окружающие секреторные ходы, и клетки сердцевинных лучей. В сосудах встречаются тиллы. Сердцевинные лучи многорядные.

(ЕФ) С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченного сырья (355) прибавляют 10 мл спирта (50%, об/об) Р и кипятят с обратным холодильником в течение 1 ч. Охлаждают, фильтруют. Фильтрат выпаривают досуха на водяной бане, остаток растворяют в 2,5 мл смеси из воды Р и спирта (50%, об/об) Р (5:20, об/об) и фильтруют.
Раствор сравнения. 2,0 мг эскулина Р и 2,0 мг каталпола Р растворяют в 20 мл смеси из воды Р и спирта (50%, об/об) Р (2:8, об/об).
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р.
Подвижная фаза: вода Р — метанол Р — метиленхлорид Р (4:30:70, об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 20 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление А: просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты А: на хроматограмме раствора сравнения в верхней части обнаруживается флуоресцирующая зона синего цвета (эскулин).
Проявление В: пластинку    опрыскивают раствором анисового альдегида Р, нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин и просматривают при дневном свете.
Результаты В: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются и другие слабые зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: почерневшие и побуревшие в изломе корневища и корни — не более 3 %; другие части растения (остатки стеблей) — не более 1,5 %. Органические примеси: не более 1 °%. Минеральные примеси: не более 1 %

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.
Общая зола (2.4.16). Не более 8,0 %

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ (ЕФ)
Определение содержания суммы элеутерозида В и элеутерозида Е. Жидкостная хроматография (2.2.29).
Испытуемый раствор. 0,500 г измельченного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл смеси из 96 % спирта Р и воды Р (50:50, об/об) и нагревают в водяной бане при температуре 60°С в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют через пористый стеклянный фильтр. Остаток с фильтра переносят в ту же круглодонную колбу вместимостью 100 мл и повторяют экстракцию дважды. Фильтраты собирают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл и упаривают при пониженном давлении до объема около 10 мл. Полученный раствор количественно переносят в мерную колбу вместимостью 20 мл, используя смесь из 96% спирта Р и воды Р (50:50, об/об), и доводят до объема 20,0 мл этим же растворителем. Фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Раствор сравнения (а). 10 мг феруловой кислоты Р растворяют в смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 20.0 мл этим же растворителем.
Раствор сравнения (b). 10 мг кофейной кислоты Р растворяют в смеси из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) и доводят до объема 20.0 мл этим же растворителем.
Раствор сравнения (с). 1 мл раствора сравнения (а) разводят смесью из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) до объема 25,0 мл. Фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Раствор сравнения (d). К 1 мл раствора сравнения (а) прибавляют 1 мл раствора сравнения (b) и доводят смесью из метанола Р и воды Р (50:50, об/об) до объема 25,0 мл. Фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм.
Условия хроматографирования:
- предколонка длиной 4 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем окта- децилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- подвижная фаза:
- подвижная фаза А: кислота фосфорная Р — вода Р (0,5:99,5, об/об);
- подвижная фаза В: ацетонитрил для хроматографии Р;

- скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;
- спектрофотометрический детектор, длина волны 220 нм;
- объем вводимой пробы: по 20 мкл испытуемого раствора и растворов сравнения (c) и (d).
Времена удерживания: элеутерозид В — около 10 мин; элеутерозид Е — около 22 мин. Отмечают пики элеутерозида В и элеутерозида Е, используя спектры поглощения, приведенные на рисунке 1 и рисунке 2.
Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения (d):
- разрешение между пиками кофейной кислоты и феруловой кислоты не менее 15.
Содержание суммы элеутерозида В и элеутерозида Е в процентах рассчитывают по формуле:

где:
S_B — площадь пика элеутерозида В на хроматограмме испытуемого раствора;
S_E — площадь пика элеутерозида Е на хроматограмме испытуемого раствора;
S_R — площадь пика феруловой кислоты на хроматограмме раствора сравнения (с);
С — концентрация феруловой кислоты в растворе сравнения (с), мкг/мл;
m — масса навески испытуемого сырья, мг.






Определение содержания суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В.
1,0 г измельченного сырья (1400) помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл и экстрагируют последовательно 20 мл спирта (70 %, об/об) Р, 20 мл 96 % спирта Р и 20 мл смеси из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об), при постоянном перемешивании при температуре не выше 50°С в течение 1 ч. Извлечения объединяют, фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу и выпаривают досуха в вакууме при температуре 40°С. К остатку прибавляют 10 мл воды Р и 10 мл тетрахлорида углерода Р, перемешивают и количественно переносят в делительную воронку, используя тетрахлорид углерода Р. Встряхивают и отбрасывают нижний, органический слой. Водный слой встряхивают дважды с тетрахлоридом углерода Р порциями по 10 мл, отбрасывая органический слой. Затем водный слой встряхивают 5 раз со смесью из хлороформа Р и 96 % спирта Р (5:1, об/об) порциями по 20 мл, 15 мл, 15 мл, 10 мл и 10 мл. Органические извлечения объединяют и фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного Р в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят смесью из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) до объема 100,0 мл. 20,0 мл полученного раствора разводят смесью из хлороформа Р и 96 % спирта Р (5:1, об/об) до объема 50,0 мл.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) полученного раствора при 278 нм, используя смесь из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) в качестве компенсационного раствора.
Содержание суммы элеутерозидов в пересчете на элеутерозид В в процентах рассчитывают по формуле:

где:
302 — удельный показатель поглощения элеутерозида В;
А — оптическая плотность раствора;
1,42 — коэффициент пересчета на сумму элеутерозидов, учитывающий молекулярные массы элеутерозидов В, В1, Е и соотношение их содержания;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25