БОЯРЫШНИКА ПЛОДЫ
Crataegi fructus
HAWTHORN BERRIES
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные в фазу полного созревания и высушенные плоды кустарников или небольших деревьев различных видов: Crataegus sanguinea PaII.; С. laevigata (Poir) DC. (syn.: С. oxyacantha sensu Pojark.); С. korolkovii L. Henry; C. altaica (Loud.) Lange; C. lorocarpa Lenne et C. Koch; C. dahurica Koehne ex Schneid.; С. monogyna Jacq.; С. alemanniensis Cm.; С. pentagyna Waldst. et Kit.; С. orientobaltica Cm.; С. curvisepala Lindm.; С. × curonica Cm.; С. × dunensis Cin. Содержат не менее 1,0 % процианидинов в пересчете на цианидина хлорид (С₁₅Н₁₁СlО₆; М.м. 322,7) в сухом сырье или не менее 0,06 % суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид (С₂₁Н₂₀О₁₂; М.м. 464,4) в сухом сырье

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
А. Внешние признаки (#2.8.3). Плоды яблокообразные, от почти шаровидной до эллипсоидальной формы, твердые, морщинистые, длиной от 5 мм до 13 мм, шириной от 4 мм до 10 мм, сверху с кольцевой оторочкой, образованной ссохшимися чашелистиками. В желтоватой мякоти плода находятся 1—5 деревянистых косточек, имеющих неправильную треугольную, овальную или сжатую с боков форму. Поверхность косточек ямчато-морщинистая или бороздчатая по спинке. Цвет плодов от желто-оранжевого и темно-красного до коричневато-красного, коричневого или черного, иногда с беловатым налетом выкристаллизовавшегося сахара. Запах отсутствует.

В. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании эпидермиса плода видны четырехшестиугольные клетки с равномерно утолщенными стенками и желто-коричневым содержимым. На поверхности эпидермиса редкие одиночные одноклеточные, слегка извилистые, на концах заостренные, толстостенные волоски. На кольцевой оторочке плода волоски многочисленные, одноклеточные, со вздутиями, притупленные у верхушки и расширенные у основания, с тонкими стенками и коричневатым содержимым. Мякоть плода состоит из клеток округлой или овальной формы, содержащих включения оранжевокрасного или коричневато-желтого цвета (каротиноиды), мелкие друзы и призматические кристаллы оксалата кальция. Во внутренней части мякоти плода проходят коллатеральные пучки, встречаются одиночные склереиды. Близ крупных пучков расположены пласты каменистых клеток; кристаллы оксалата кальция местами образуют кристаллоносную обкладку. При измельчении сырья (355) видны: продолговатые, одноклеточные, часто изогнутые, конические, с гладкими, утолщенными и одревесневшими стенками волоски; паренхиматозные скопления фрагментов поверхностного слоя с красными пигментами; некоторые клетки внутренних слоев содержат небольшие группы кристаллов оксалата кальция; иногда обнаруживаются группы склереид, около проводящих пучков каменистые клетки и призматические кристаллы оксалата кальция; встречаются фрагменты эпидермального слоя, состоящего из шестиугольных слизистых клеток, под которыми находится слой желто-коричневого пигмента, содержащий многочисленные удлиненные призмы оксалата кальция; толстостенная паренхима эндосперма и семядолей, содержащие алейроновые зерна и капли жирного масла.

(ЕФ) С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р и нагревают в водяной бане при 65°С в течение 5 мин при частом встряхивании. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Фильтрат доводят метанолом Р до объема 10 мл.
Раствор сравнения. 2 мг хлорогеновой кислоты Р, 2 мг кофейной кислоты Р, 5 мг гипе- розида Р и 5 мг рутина Р растворяют в 20 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля Р.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: 30 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора сравнения в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: горячую пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 30 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются и другие флуоресцирующие зоны.


ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: подгоревшие плоды — не более 2 %; плоды недозрелые (буровато-зеленые) — не более 1 %; плоды, поврежденные вредителями, дробленые, отдельные косточки, плодоножки, в том числе отделенные при анализе, — не более 5 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32) Не более 14,0 %. 3,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

(ЕФ) Общая зола (2.4.16). Не более 5,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 1,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ (ЕФ)
Определение содержания процианидинов в пересчете на цианидина хлорид.
К 2,50 г измельченного сырья (355) прибавляют 30 мл спирта (70 %, об/об) Р, нагревают с обратным холодильником в течение 30 мин и фильтруют. Остаток промывают 10,0 мл спирта (70 %, об/об) Р. К фильтрату прибавляют 15,0 мл кислоты хлористоводородной Р1 и 10,0 мл воды Р и нагревают с обратным холодильником в течение 80 мин, после чего охлаждают, фильтруют и промывают остаток спиртом (70 %, об/об) Р до прекращения окрашивания фильтрата. Объем фильтрата доводят спиртом (70 %, об/об) Р до 250,0 мл. 50,0 мл полученного раствора выпаривают в круглодонной колбе до объема приблизительно 3 мл и переносят в делительную воронку. Ополаскивают круглодонную колбу последовательно 10 мл и 5 мл воды Р и переносят в делительную воронку. Полученный раствор встряхивают трижды с бутанолом Р порциями по 15 мл. Органические слои объединяют и доводят бутанолом Р до объема 100,0 мл.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) раствора при 545 нм.
Содержание процианидина в пересчете на цианидина хлорид в процентах рассчитывают по формуле:

где:
75 — удельный показатель поглощения циа- нидина хлорида;
А — оптическая плотность раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.
Определение содержания флавоноидов в пересчете на гиперозид.
5,000 г измельченного сырья (2000) помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50,0 мл 96% спирта Р, взвешивают с точностью до 0,01 г и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. Колбу с содержимым охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят массу колбы до первоначальной 96 % спиртом Р. Полученный раствор процеживают через ватный тампон толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 15 мл фильтрата; 25,0 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу вместимостью 50 мл и выпаривают досуха в вакууме. Сухой остаток обрабатывают дважды горячим раствором 100 г/л натрия хлорида Р порциями по 10 мл, каждый раз нагревая содержимое колбы на водяной бане в течение 2 мин. Раствор охлаждают, процеживают через ватный тампон, смоченный водой Р, на колонку, заполненную полиамидом для колоночной хроматографии Р (1,0 г полиамида для колоночной хроматографии Р помещают в стаканчик вместимостью 50 мл, прибавляют 30 мл воды Р, перемешивают и выливают через воронку в колонку диаметром 1,5 см и высотой 25 см. В нижнюю часть колонки предварительно помещают небольшой ватный тампон, смоченный водой Р. Колонку заполняют при открытом кране. Элюирование проводят со скоростью 4 мл/мин, не допуская обнажения поверхности сорбента. Толщина слоя жидкости над сорбентом должна быть не менее 4—5 мм). Колонку промывают 30,0 мл воды Р, из них 10 мл используют для промывания фильтра, который после этого убирают. Когда над сорбентом останется слой жидкости толщиной 7—10 мм, водный элюат отбрасывают. Элюирование суммы флавоноидов проводят 25 мл 96% спирта Р, который прибавляют в колонку постепенно, порциями по 5 мл. Первые порции элюата (бесцветные и прозрачные) собирают в градуированную пробирку вместимостью 10 мл и диаметром около 1 см. Когда элюат приобретет окраску и обьем окрашенного элюата в пробирке достигнет 1 мл, мерную пробирку убирают (граница раздела бесцветного водного и окрашенного спиртового слоев элюата в пробирке хорошо различима визуально). Элюат из пробирки отбрасывают. Последующие порции элюата собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем элюата в колбе доводят 96% спиртом Р до 25,0 мл (раствор А).
Испытуемый раствор. 2,0 мл раствора А доводят 96 % спиртом Р до объема 10,0 мл.
Раствор сравнения. 2,0 мл раствора 1 г/л ФСО гиперозида в 96 % спирте Р помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл со шлифом и выпаривают досуха под вакуумом. Остаток в колбе обрабатывают дважды горячим раствором 100 г/л натрия хлорида Р порциями по 10 мл, каждый раз нагревая содержимое колбы на водяной бане в течение 2 мин, и сливают раствор на вновь приготовленную колонку, заполненную полиамидом для колоночной хроматографии Р, процеживая через ватный тампон, смоченный водой Р. Элюат для измерения оптической плотности стандартного образца гиперозида получают аналогично элюату суммы флавоноидов.
Компенсационный раствор. Получают аналогично элюату суммы флавоноидов путем пропускания 25,0 мл 96% спирта Р через вновь приготовленную колонку, заполненную полиамидом для колоночной хроматографии Р, в мерную колбу вместимостью 25 мл. Объем элюата доводят 96 % спиртом Р до 25,0 мл.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора и раствора сравнения при 365 нм.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид в процентах рассчитывают по формуле:

где:
A — оптическая плотность испытуемого раствора;
А₀ — оптическая плотность раствора сравнения;
m — масса навески испытуемого сырья, г;
m₀ — масса навески ФСО гиперозида, г;
Р — содержание гиперозида в ФСО, %.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.