Государственная Фармакопея (ГФ РБ) Том 2 стр. 328-330. Валерианы корневища с корнями.

ВАЛЕРИАНЫ КОРНЕВИЩА С КОРНЯМИ
Valerianae rhizomata cum radicibus
VALERIAN ROOT
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Высушенные целые или фрагментированные подземные части растения Valeriana officinalis L. s.l., включая корневища с корнями и столонами.
Содержат:
- цельное и фрагментированное сырье: не менее 0,17% (м/м) суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту (С₁₅Н₂₂О₂; М.м. 234,3) в сухом сырье или не менее 2 % суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты в сухом сырье;
- измельченное сырье: не менее 0,10 % (м/м) суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту (С15Н22О2; М.м. 234,3) в сухом сырье или не менее 2 % суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Корневища от желтовато-серого до бледного коричневатосерого цвета, от конической до цилиндрической формы, длиной приблизительно до 50 мм и диаметром 30 мм, основание удлиненное или сжатое, обычно полностью покрытое многочисленными корнями. На верхушке обычно имеется чашеобразный рубец от надземных частей; иногда присутствуют основания стеблей. На продольном разрезе в центре сердцевины видна полость с поперечными перегородками. Корни многочисленные, почти цилиндрической формы, цвет такой же, как у корневищ, диаметром от 1 до 3 мм, длина иногда превышает 100 мм. Присутствует небольшое количество нитевидных хрупких вторичных корней. На столонах имеются выступающие узлы, разделенные бороздчатыми междоузлиями длиной от 20 мм до 50 мм, имеющими волокнистый излом.

B. Микроскопия (#2.8.3). Исследуют измельченное сырье (355). Цвет от бледного желтоватосерого до бледного серовато-коричневого. Видны: клетки, содержащие бледно-коричневую смолу или каплевидные включения эфирного масла; группы небольших прямоугольных скле- реид с толстыми стенками; редкие группы более крупных склереид основания стебля с более тонкими клеточными стенками; лигнифицированные сосуды с сетчатыми утолщениями, встречающиеся группами или по отдельности; отдельные фрагменты клеток коры и эпидермических клеток, на некоторых из которых имеются корневые волоски; редкие фрагменты пробки.
При использовании 50 % (об/об) раствора глицерина Р в измельченном сырье (355) видны многочисленные крахмальные зерна, в основном сложные, содержащие до 4—6 составляющих, но часто распадающиеся на отдельные гранулы округлой или неправильной формы диаметром до 15 мкм; большинство гранул имеют неотчетливые трещинки или радиальный центр наслоения.

(ЕФ) С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. 1 г измельченного сырья (355) суспендируют в 10 мл метанола Р и обрабатывают ультразвуком в течение 10 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм. Используют фильтрат.
Раствор сравнения. 5 мг кислоты ацетоксивалереновой Р и 5 мг кислоты валереновой Р растворяют в 20 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (5—40 мкм) [или ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р (2—10 мкм)].
Подвижная фаза: кислота уксусная ледяная Р — этилацетат Р — циклогексан Р (2:38:60, об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 20 мкл [5 мкл] в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см [6 см] от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором анисового альдегида Р. Нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5—10 мин. Просматривают при дневном свете.
Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие зоны фиолетового цвета.


ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: остатки листьев и стеблей, в том числе и отделенные при анализе, а также старые отмершие корневища - не более 5 %. Органические примеси: не более 2 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 15,0 %. 1,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 13,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 10,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(ЕФ) Определение содержания суммы сесквитерпеновых кислот. Жидкостная хроматография (2.2.29).
Испытуемый раствор. 1,50 г измельченного сырья (710) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл со шлифом, прибавляют 20 мл метанола Р1, перемешивают и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Охлаждают и фильтруют. Фильтр с остатком помещают в ту же круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 20 мл метанола Р1 и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин. Охлаждают и фильтруют. Фильтраты объединяют и доводят метанолом Р1 до объема 50,0 мл, ополаскивая круглодонную колбу и фильтр этим же  растворителем.
Раствор сравнения. Количество ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного, соответствующее 1,0 мг валереновой кислоты, растворяют в метаноле Р1 и доводят до объема 10,0 мл этим же растворителем.
Условия хроматографирования:
- колонка длиной 0,25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- подвижная фаза:
- подвижная фаза А: ацетонитрил Р — раствор 5 г/л фосфорной кислоты Р (20:80, об/об);
- подвижная фаза В: раствор 5 г/л фосфорной кислоты Р — ацетонитрил Р (20:80, об/об);

- скорость подвижной фазы: 1,5 мл/мин;
- спектрофотометрический детектор, длина волны 220 нм;
- объем вводимой пробы: 20 мкл.
Идентификация пиков: для идентификации
пиков ацетоксивалереновой кислоты и валереновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения используют хроматограмму, прилагаемую к ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного.
Пригодность хроматографической системы: раствор сравнения:
- относительное время удерживания (по отношению к валереновой кислоте, время удерживания около 21 мин): ацетоксивалереновая кислота — около 0,5.
Содержание суммы сесквитерпеновых кислот в пересчете на валереновую кислоту в процентах рассчитывают по формуле:

где:
S₁ — площадь пика ацетоксивалереновой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S₂ — площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S₃ — площадь пика валереновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения;
m₁ — масса навески испытуемого сырья, г;
m₂ — масса навески ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного, г;
Р — содержание валереновой кислоты в ФСО сухого экстракта валерианы стандартизированного, %.
Определение содержания суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты.
5,000 г измельченного сырья (500) помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл смеси из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) и встряхивают в течение 45 мин. Фильтруют через бумажный фильтр, смоченный смесью из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об), в мерную колбу вместимостью 100 мл, избегая попадания частиц сырья на фильтр. В колбу с остатком сырья прибавляют 40 мл смеси из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) и встряхивают в течение 15 мин. Фильтруют в ту же мерную колбу и доводят смесью из хлороформа Р и 96% спирта Р (5:1, об/об) до объема 100,0    мл (раствор А).
Испытуемый раствор. 5,0 мл раствора А помещают в круглодонную колбу вместимостью 50 мл и выпаривают в вакууме при температуре от 40°С до 50°С досуха. К полученному сухому остатку прибавляют 5,0 мл гидроксиламина раствора щелочного Р3, выдерживают в течение 20 мин, прибавляют 10,0 мл 1 М раствора хлористоводородной кислоты, 5,0 мл раствора 10 г/л железа (III) хлорида Р в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, смоченный водой Р.
Компенсационный раствор. К 5,0 мл гидрок- силамина раствора щелочного Р3 прибавляют 10,0    мл 1М раствора хлористоводородной кислоты и 5,0 мл раствора 10 г/л железа (III) хлорида Р в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 512 нм.
Содержание суммы сложных эфиров в пересчете на этиловый эфир валереновой кислоты в процентах рассчитывают по формуле:

где:
10,5 — удельный показатель поглощения гидроксамата валереновой кислоты;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.