Государственная Фармакопея (ГФ РБ) Том 2 стр. 346. Зверобоя трава

ЗВЕРОБОЯ ТРАВА
Hyperici herba
ST. JOHN’S WORT

ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранная в фазу цветения и высушенная трава многолетних травяных растений Hyperiсum perforatum L. и Hypericum maculatum Crantz (H. quadrangulum L.). Содержит не менее 0,08 % суммы гиперицинов в пересчете на гиперицин (С₃₀Н₁₆О₈; М.м. 504,4) в сухом сырье или не менее 1,5 % суммы флавоноидов в пересчете на рутин (С₂₇Н₃₀О₁₆; М.м. 611) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Верхние части стеблей с листьями, цветками, бутонами и недозрелыми плодами. Стебли полые, цилиндрические, длиной до 30 см, с двумя (Н. perforatum) или четырьмя (H. maculatum) продольными ребрами. Листья супротивные, сидячие, продолговатые или продолговато-овальные, цельнокрайние, голые, до 3,5 см, шириной до 1,4 см. У Hypericum perforatum листья с многочисленными просвечивающимися вместилищами в виде светлых точек. Цветки многочисленные, около 1—1,5 см в диаметре, собраны в щитковидную метелку. Чашечка сростнолистная, глубокопятираздельная, чашелистики ланцетовидные, тонко заостренные (H. perforatum) или продолговато-овальные с притупленной верхушкой (Н. maculatum). Венчик раздельнолепестной, в 2—3 раза длиннее чашечки, лепестков пять. Тычинки многочисленные, сросшиеся у основания нитями в три пучка. Плод — трехгнездная многосемянная коробочка. Цвет стеблей — от зеленовато-желтого до серовато-зеленого, иногда розовато-фиолетовый; листьев — от серовато-зеленого до темно-зеленого; лепестков — ярко-желтый или желтый с черными точками, хорошо заметными под лупой; плодов — зеленовато-коричневый. Запах слабый, своеобразный.
B. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании листа с поверхности видны клетки эпидермиса с извилистыми стенками, имеющими четковидные утолщения. Устьица аномоцитного или парацитного типа, расположены только на нижней стороне листа. Встречаются вместилища двух типов: пигментированные вместилища овальной формы, содержащие красновато-фиолетовый пигмент, расположены в основном по краю листа; бесцветные просвечивающиеся вместилища (H. perforatum) встречаются по всей пластинке листа, вдоль жилок они продольно вытянуты, у Hypericum maculatum встречаются редко или отсутствуют.
ЕФ D. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченного сырья (500) прибавляют 10 мл метанола Р, выдерживают в водяной бане при температуре 60°С в течение 10 мин при перемешивании и фильтруют.
Раствор сравнения. 5 мг рутина Р и 5 мг гиперозида Р растворяют в метаноле Р и доводят объем до 5 мл этим же растворителем.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — этилацетат Р (6:9:90, об/об).
Наносимый объем пробы: 10 мкл испытуемого раствора и 5 мкл раствора сравнения в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С в течение 10 мин.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Через 30 мин пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: на хроматограмме раствора сравнения в нижней трети обнаруживаются флуоресцирующая зона (рутин) и расположенная над ней флуоресцирующая зона (гиперозид), обе зоны желто-оранжевого цвета. На хроматограмме испытуемого раствора в нижней трети обнаруживаются красно-оранжевые флуоресцирующие зоны, соответствующие рутину и гиперозиду, в нижней части верхней трети — флуоресцирующая зона (псевдогиперицин) и над ней флуоресцирующая зона (гиперицин), обе зоны красного цвета. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: стебли — не более 50 %. Органические примеси: не более 1 %. Минеральные примеси: не более 1 %.
Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 13,0 %. 3,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.
Общая зола (2.4.16). Не более 8,0 %.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 1,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЕФ Определение содержания суммы гиперицинов в пересчете на гиперицин.
Испытуемый раствор. 0,800 г измельченного сырья (500), 60 мл смеси из воды Р и тетрагидрофурана Р (20:80, об/об) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл с магнитной мешалкой. Смесь кипятят с обратным холодильником в водяной бане при температуре 70°С в течение 30 мин, затем центрифугируют при 700 g в течение 2 мин. Надосадочную жидкость помещают в колбу вместимостью 250 мл. Остаток помещают в ту же круглодонную колбу объемом 100 мл, прибавляют 60 мл смеси из воды Р и тетрагидрофурана Р (20:80, об/об), нагревают с обратным холодильником в течение 30 мин и центрифугируют при 700 g в течение 2 мин. Надосадочную жидкость помещают в колбу с первым извлечением и выпаривают досуха. Остаток после выпаривания с помощью ультразвука растворяют в 15 мл метанола Р, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, в которую прибавляют метанол Р после промывания колбы объемом 250 мл, и доводят до объема 25,0 мл этим же растворителем. Центрифугируют и фильтруют 10 мл надосадочной жидкости через мембранный фильтр (0,2 мкм), отбрасывая первые 2 мл фильтрата.
5,0 мл фильтрата доводят метанолом Р до объема 25,0 мл.
Компенсационный раствор. Метанол Р.
Измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 590 нм. Содержание гиперицинов в пересчете на гиперицин в процентах рассчитывают по формуле:

                              А*125
                              m*870

где:
870 — удельный показатель поглощения гиперицина;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин. 1,000 г измельченного сырья (710) помещают в колбу вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта (50%, об/об) Р. Нагревают с обратным холодильником в водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок колбы. Горячее извлечение процеживают через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Ватный тампон помещают в колбу для экстрагирования и прибавляют 30 мл спирта (50 %, об/об) Р. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, процеживая извлечение в ту же мерную колбу. Охлаждают и доводят спиртом (50 %, об/об) Р до объема 100,0 мл (раствор А).
Испытуемый раствор. 1,0 мл раствора А и 1,0 мл раствора 50 г/л алюминия хлорида Р в 96 % спирте Р доводят 96% спиртом Р до объема 25,0 мл.
Раствор сравнения. 0,0500 г ФСО рутина, предварительно высушенного при температуре от 130°С до 135°С в течение 3 ч, растворяют в 96 % спирте Р при нагревании на водяной бане, охлаждают и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем. К 1,0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл раствора 20 г/л алюминия хлорида Р в 96 % спирте Р и доводят 96 % спиртом Р до объема 25,0 мл.
Компенсационный раствор. 1,0 мл раствора А и 1 каплю кислоты уксусной разведенной Р доводят 96 % спиртом Р до объема 25,0 мл
Через 40 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) растворов при 415 нм.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах рассчитывают по формуле:

где:
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
А₀ — оптическая плотность раствора сравнения;
m — масса навески испытуемого сырья, г;
m₀ — масса навески ФСО рутина, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.