НОГОТКОВ ЦВЕТКИ (КАЛЕНДУЛЫ ЦВЕТКИ)
Calendulae flores
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные в начале распускания трубчатых цветков и высушенные цветочные корзинки растения Calendula officinalis L. Содержат: не менее 0,4 % суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид (С₂₁Н₂₀О₁₂; М.м. 464,4) в сухом сырье или не менее 0,6 % суммы флавоноидов в пересчете на рутин (С₂₇Н₃₀О₁₆; М.м. 611) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
Первая идентификация: А, В, С.
Вторая идентификация: А, В, D.
A. Внешние признаки (#2.8.3). Цельные или частично осыпавшиеся корзинки диаметром до 5 см, без цветоносов или с остатками цветоносов длиной не более 3 см. Обвертка серо-зеленая,    одно—двухрядная; листочки ее линейные, заостренные, густоопушенные. Цветоложе слегка выпуклое, голое. Краевые цветки язычковые, длиной 15—28 мм, шириной 3—5 мм с изогнутой короткой опушенной трубкой, трехзубчатым отгибом, вдвое превышающим обвертку, и 4—5 жилками. Цветки расположены в 2—3 ряда у немахровых и в 10—15 рядов у махровых форм. Пестик с изогнутой нижней одногнездной завязью, тонким столбиком и двухлопастным рыльцем. Срединные цветки трубчатые с пятизубчатым венчиком. Цвет краевых цветков красновато-оранжевый, оранжевый, ярко- или бледно-желтый; срединных — оранжевый, желтовато-коричневый или желтый. Запах слабый.

B. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании язычковых цветков с поверхности видны удлиненные клетки эпидермиса с оранжевыми округлыми хроматопластами; на зубчиках эпидермис с сосочками, иногда с устьицами; трубка венчика густо опушена простыми и железистыми одно—двухрядными волосками; завязь также опушена: с выпуклой стороны — железистыми, по краям вогнутой стороны — простыми двухрядными волосками. Головка железистых волосков состоит из 2, 4 или 8 клеток. Эпидермис трубчатых цветков такой же, как у язычковых, но у зубчиков он с более вытянутыми сосочками; нижняя часть трубки венчика и завязь густо опушены одно—двухрядными железистыми, реже двухрядными простыми волосками. Складчатость кутикулы, обычно маскируемая хромопластами, просматривается только на отдельных участках. Пыльца округлая, шиповатая. Эпидермис листочков обвертки по краю представлен удлиненными клетками с прямыми стенками, в средней части — извилистыми стенками и устьицами; листочки обвертки густо опушены: по краю — длинными одно—двухрядными простыми, двухрядными железистыми и ветвистыми волосками; в средней части — только железистыми клетками.

(ЕФ) С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 1,0 г измельченного сырья (500) прибавляют 10 мл метанола Р и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 10 мин. Охлаждают и фильтруют.
Раствор сравнения. 1,0 мг кислоты кофейной Р, 1,0 мг кислоты хлорогеновой Р и 2,5 мг рутина Р растворяют в 10 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — этилацетат Р (10:10:80, об/об/об).
Наносимый объем пробы: 20 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора сравнения в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: горячую пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Пластинку высушивают на воздухе в течение 30 мин и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: на хроматограмме раствора сравнения обнаруживаются: в нижней части флуоресцирующая зона желтовато-коричневого цвета (рутин), в средней части светлая флуоресцирующая зона синеватого цвета (хлорогеновая кислота) и в верхней части светлая флуоресцирующая зона синего цвета (кофейная кислота). На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются: флуоресцирующая зона желтоватокоричневого цвета, соответствующая рутину на хроматограмме раствора сравнения, ниже нее флуоресцирующая зона желтовато-зеленого цвета и непосредственно над ней флуоресцирующая зона светло-синего цвета, соответствующая хлорогеновой кислоте на хроматограмме раствора сравнения, флуоресцирующая зона желтовато-зеленого цвета над ней и флуоресцирующая зона светло-синего цвета немного ниже зоны, соответствующей кофейной кислоте на хроматограмме раствора сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие флуоресцирующие зоны.

D. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. 1 г измельченного сырья (1000) помещают в колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл спирта (50%, об/об) Р и кипятят с обратным холодильником в водяной бане в течение 30 мин при периодическом перемешивании. Охлаждают и фильтруют.
Раствор сравнения. 5 мг рутина Р растворяют в 10 мл 96 % спирта Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.
Подвижная фаза: бутанол Р — кислота уксусная ледяная Р — вода Р (4:1:2, об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 20 г/л алюминия хлорида Р в 96 % спирте Р, нагревают в сушильном шкафу в течение 2—3 мин при температуре от 100°С до 105°С и просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются флуоресцирующая зона ярко-желтого цвета на уровне зоны такого же цвета на хроматограмме раствора сравнения, не менее двух других флуоресцирующих зон ярко-желтого цвета и двух зон голубого цвета. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: остатки цветоносов, в том числе отделенные от корзинок при анализе, — не более 6 %; корзинки с полностью осыпавшимися язычковыми и трубчатыми цветками (цветоложе с обвертками) — не более 20 %; побуревшие корзинки — не более 3 %; другие части растения (кусочки стеблей и листьев) — не более 3 %. Органические примеси: не более 0,5 %. Минеральные примеси: не более 0,5 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

Общая зола (2.4.16). Не более 11,0 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 5,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(ЕФ) Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на гиперозид.
0,800 г измельченного сырья (500) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл раствора 5 г/л гексаметилентетрамина Р, 20 мл ацетона Р и 7 мл кислоты хлористоводородной Р1. Кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего извлечение процеживают через ватный тампон в колбу. Ватный тампон помещают в круглодонную колбу с остатком сырья и дважды кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин, каждый раз прибавляя 20 мл ацетона Р в качестве экстрагента. Охлаждают и процеживают через ватный тампон. Объединенные ацетоновые извлечения фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, ополаскивают круглодонную колбу ацетоном Р и фильтруют через тот же фильтр, после чего фильтр промывают ацетоном Р. Объем раствора доводят до 100,0 мл ацетоном Р. 20,0 мл полученного раствора помещают в делительную воронку, прибавляют 20 мл воды Р и экстрагируют этилацетатом Р порцией 15 мл, затем еще трижды порциями по 10 мл. Этилацетатные извлечения объединяют, помещают в делительную воронку и дважды промывают водой Р порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через бумажный фильтр с 10 г натрия сульфата безводного Р в мерную колбу, вместимостью 50 мл и доводят этилацетатом Р до объема 50,0 мл (раствор А).
Испытуемый раствор. К 10,0 мл раствора А прибавляют 1 мл реактива алюминия хлорида Р и доводят 5 % (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема
25.0 мл.
Компенсационный раствор. 10,0 мл раствора А доводят 5 % (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема 25.0 мл.
Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 425 нм.
Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид в процентах рассчитывают по формуле:

где:
500 — удельный показатель поглощения гиперозида;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.
Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете на рутин. 1,000 г измельченного сырья (710) помещают в колбу вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта (50%, об/об) Р. и нагревают с обратным холодильником в водяной бане в течение 30 мин, периодически встряхивая для смывания частиц сырья со стенок. Горячее извлечение процеживают через ватный тампон в мерную колбу вместимостью 100 мл так, чтобы частицы сырья не попадали на фильтр. Ватный тампон помещают в колбу с остатком сырья и прибавляют 30 мл спирта (50%, об/об) Р. Экстракцию повторяют еще дважды в описанных выше условиях, процеживая извлечение в ту же мерную колбу. Охлаждают и доводят спиртом (50 %, об/об) Р до объема 100.0 мл (раствор А).
Испытуемый раствор. К 1,0 мл раствора А прибавляют 10 мл спирта (70%, об/об) Р и
2.0 мл раствора 50 г/л алюминия хлорида Р в спирте (70 %, об/об) Р. Через 10 мин прибавляют 2,0 мл 5 % (об/об) раствора кислоты уксусной Р в спирте (70 %, об/об) Р и доводят спиртом (70%, об/об) Р до объема 25,0 мл.
Компенсационный раствор. К 1,0 мл раствора А прибавляют 10 мл спирта (70 %, об/об) Р и 2,0 мл 5 % (об/об) раствора кислоты уксусной Р в спирте (70 %, об/об) Р и доводят спиртом (70 %, об/об) Р до объема 25,0 мл.
Через 1 ч измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 408 нм.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в процентах рассчитывают по формуле:

где:
220 — удельный показатель поглощения комплекса рутина с алюминия хлоридом;
А — оптическая плотность испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.