БЕРЕЗЫ ЛИСТЬЯ
Betulae folia
BIRCH LEAF

ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Цельные или измельченные высушенные листья Betula pendula Roth и/или Betula pubescens Ehrh., а так же их гибридов. Содержит не менее 1,5 % флавоноидов в пересчете на гиперозид (C₂₁H₂₀O₁₂; М.м. 464,4) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Листья обоих видов темно-зеленые с верхней стороны и более светлые зеленовато-серого цвета с нижней стороны; с плотным сетчатым жилкованием. Жилки от светло-коричневого до почти белого цвета.
Листья Betula pendula гладкие с близко расположенными железистыми углублениями на обеих сторонах; длиной от 3 см до 7 см и шириной от 2 см до 5 см; черешок длинный, край листа дважды-пильчатый, пластинка листа по форме от треугольной до ромбовидной с ширококлиновидным или закругленным основанием. Вершина листа длинная и заостренная.
Листья Betula pubescens имеют небольшое количество железистых волосков на обеих сторонах. На нижней стороне в точках разветвления жилок находятся небольшие скопления желтовато-серых трихом. Пластинка листа Betula pubescens по форме от овальной до ромбовидной, с заостренной верхушкой и, чаще всего, с закругленным основанием. Край листа пильчатый.

B. Микроскопия (#2.8.3). Исследуют измельченное сырье (355). Цвет зеленоватосерый. Видны: фрагменты листовой пластинки с прямостенными эпидермальными клетками и клетками нижней эпидермы с устьицами аномоцитного типа; на верхней и нижней эпидерме большие щитовидные железки, размером обычно от 100 мкм до 120 мкм; фрагменты мезофилла с кристаллами оксалата кальция; фрагменты сосудистых пучков и склеренхимные волокна с кристаллическими обкладками. Если сырье содержит Betula pubescens, в порошке обнаруживаются одноклеточные волоски с очень толстыми стенками, длиной приблизительно от 80 мкм до 600 мкм (обычно от 100 мкм до 200 мкм).

C. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 1 г измельченного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р и нагревают в водяной бане при 60°C в течение 5 мин. Охлаждают и фильтруют.
Раствор сравнения. 1 мг кофейной кислоты Р, 1 мг хлорогеновой кислоты Р, 2,5 мг гиперозида Р и 2,5 мг рутина Р растворяют в 10 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем подходящего силикагеля.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: в токе теплого воздуха.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р. Через 30 мин пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм.
Результаты: на хроматограмме раствора сравнения в нижней половине обнаруживаются три флуоресцирующие зоны (в порядке увеличения значения R_f): желтовато-коричневого цвета (рутин), светло-синего цвета (хлорогеновая кислота) и желтовато-коричневого цвета (гиперозид); в верхней трети — флуоресцирующая зона светло-синего цвета (кофейная кислота). На хроматограмме испытуемого раствора обнаруживаются три флуоресцирующие зоны, соответствующие зонам рутина, хлорогеновой кислоты и гиперозида на хроматограмме раствора сравнения. Зона, соответствующая рутину, имеет очень слабую флуоресценцию, а зона, соответствующая гиперозиду, — интенсивную флуоресценцию. Также наблюдаются другие желтоватокоричневые зоны со слабой флуоресценцией между зонами, соответствующими кофейной кислоте и хлорогеновой кислоте на хроматограмме раствора сравнения. Около фронта растворителей обнаруживается флуоресцирующая зона красного цвета, соответствующая хлорофиллам. На хроматограмме испытуемого раствора между этой зоной и зоной, соответствующей кофейной кислоте на хроматограмме раствора сравнения, обнаруживается коричневато-желтая зона, соответствующая кверцетину.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)

Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: фрагменты сережек — не более 3%. Другие допустимые примеси: не более 3%.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 10,0%. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°C до 105°Cв течение 2 ч.

Общая зола (2.4.16). Не более 5,0%.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

0,200 г измельченного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют 1 мл раствора 5 г/л гексаметилентетрамина Р, 20 мл ацетона Р и 2 мл кислоты хлористоводородной Р1. Кипятят с обратным холодильником в течение 30 мин, после чего извлечение процеживают через ватный тампон в колбу вместимостью 100 мл. Ватный тампон помещают в круглодонную колбу с остатком и дважды кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин, каждый раз прибавляя 20 мл ацетона Р в качестве экстрагента. Охлаждают и процеживают через ватный тампон. Объединенные ацетоновые извлечения фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл, ополаскивают круглодонную колбу ацетоном Р и фильтруют через тот же фильтр, после чего промывают фильтр ацетоном Р. Объем раствора доводят до 100,0  мл ацетоном Р. 20,0 мл полученного раствора помещают в делительную воронку, прибавляют 20 мл воды Р и экстрагируют этилацетатом Р порцией 15 мл, затем еще трижды порциями по 10 мл. Этилацетатные извлечения объединяют, помещают в делительную воронку и дважды промывают водой Р порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через бумажный фильтр с 10 г натрия сульфата безводного Р в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят этилацетатом Р до объема 50,0 мл (раствор А).

Испытуемый раствор. К 10,0 мл раствора А прибавляют 1 мл реактива алюминия хлорида Р и доводят 5% (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема 25.0 мл.

Компенсационный раствор. 10,0 мл раствора А доводят 5% (об/об) раствором кислоты уксусной ледяной Р в метаноле Р до объема

25.0 мл.

Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) испытуемого раствора при 425 нм.

Содержание флавоноидов в пересчете на гиперозид в процентах рассчитывают по формуле:

где:

500 — удельный показатель поглощения гиперозида;

А — оптическая плотность испытуемого раствора;

m— масса навески испытуемого сырья, г.

ХРАНЕНИЕ

В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.