АРНИКИ ЦВЕТКИ
Arnicae fiores
ARNICA FLOWER
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные в начале цветения и высушенные цветки многолетнего травянистого растения Arnica montana L., Arnica foiiosa Nutt. и Arnica schamissonis Less. Содержат не менее 0,40 % суммы сесквитерпеновых лактонов в пересчете на дигидрогеленалина тиглат в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
A. Внешние признаки (#2.8.3). Сырье представляет собой отдельные краевые ложноязычковые и трубчатые цветки, семянки с хохолком, цветоложа распавшихся соцветий, реже цельные корзинки. Ложноязычковые цветки длиной до 2,5 см с трехзубчатым отгибом, трубчатые — длиной до 1,5 см пятичленные; окраска цветков от оранжево-желтой до светло-оранжево-желтой. Цветоложе соцветия слегка выпуклое, ямчатое, с короткими щетинистыми волосками вокруг ямок. Корзинки диаметром 2—6 см (с краевыми цветками) и 1,2—3,2 см (без краевых цветков) с остатками цветоносов длиной до 3 см или без них. Семянки продолговатые светло-желтокоричневого цвета с однорядным хохолком из желтоватых, неветвистых, тонких щетинок длиной до 1 см. Запах слабый, ароматный.

B. Микроскопия (#2.8.3). При просматривании цветков с поверхности видны: сосочковидный эпидермис зубчиков язычковых и трубчатых цветков; желто-оранжевые округлые хромопласты в эпидермальных клетках язычковых цветков; прямоугольные с четковидными утолщенными стенками клетки эпидермиса завязи цветков с фитомеланином; извилистостенный эпидермис листочков обвертки с устьицами аномоцитного типа; многочисленные, разнообразные по строению волоски: простые одноклеточные, на завязи сросшиеся по два-три, простые многоклеточные тонкостенные из 3—7 клеток, часто с удлиненной конечной клеткой, железистые на одно- или двухрядной ножке с многоклеточной, реже с одно- или двуклеточной головкой; многочисленные железки на всех элементах цветков из 6—10 выделительных клеток, расположенных в один или два ряда; округлая, шиповатая пыльца.

(ЕФ) С. Просматривают хроматограмму, полученную в испытании «Calendula officinalis L. — Heterotheca inuloides». На хроматограмме испытуемого раствора в средней части обнаруживается флуоресцирующая зона синего цвета, соответствующая зоне хлорогеновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения; над этой зоной — три флуоресцирующих зоны от желтоватокоричневого до оранжево-желтого цвета; над этими тремя зонами — флуоресцирующая зона зеленовато-желтого цвета, соответствующая астрагалину. Зона, расположенная ниже зоны астрагалина, соответствует изокверцитрозиду; зона, расположенная непосредственно под ней, соответствует лютеолин-7-глюкозиду. На хроматограмме испытуемого раствора также обнаруживается флуоресцирующая зона зеленовато-синего цвета, расположенная ниже зоны кофейной кислоты на хроматограмме раствора сравнения.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: частицы, проходящие сквозь сито (2000), — не более 6 %. Органические примеси: не более 2 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

(ЕФ) Calendula officinalis L. — Heterotheca inuloides. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 2,00 г измельченного сырья (710) прибавляют 10 мл метанола Р. Нагревают при перемешивании в водяной бане при 60°С в течение 5 мин. Охлаждают и фильтруют.
Раствор сравнения. 2,0 мг кофейной кислоты Р, 2,0 мг хлорогеновой кислоты Р и 5,0 мг рутина Р растворяют в метаноле Р и доводят до объема 30 мл этим же растворителем.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метилэтилкетон Р — этилацетат Р (10:10:30:50, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 15 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р и затем раствором 50 г/л макрогола 400 Р в метаноле Р Нагревают при температуре от 100°С до 105°С в течение 5 мин. Высушивают на воздухе и просматривают в ультрафиолетовом свете при 365 нм.
Результаты: на хроматограмме раствора сравнения обнаруживается в нижней части флуоресцирующая зона оранжево-желтого цвета (рутин), в средней части — флуоресцирующая зона (хлорогеновая кислота), в верхней части — флуоресцирующая зона светло-синеватого цвета (кофейная кислота). На хроматограмме испытуемого раствора не должны обнаруживаться ни флуоресцирующая зона оранжево-желтого цвета, соответствующая рутину на хроматограмме раствора сравнения, ни зона, расположенная ниже зоны, соответствующей рутину.

(ЕФ) Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 10,0 %. 1,000 г измельченного сырья (355) сушат при температуре от 100°С до 105°С в течение 2 ч.

Общая зола (2.4.16). Не более 9,0 % (Arnica montana L., Arnica foliosa Nutt.) и не более 12,0 % (Arnica schamissonis Less.).

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
(ЕФ) Жидкостная хроматография (2.2.29): определение проводят с использованием сантонина Р в качестве внутреннего стандарта.
Раствор внутреннего стандарта. Растворяют непосредственно перед использованием 0,010 г сантонина Р в 10,0 мл метанола Р.
Испытуемый раствор. 1,00 г измельченного сырья (355) помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл смеси из равных объемов метанола Р и воды Р. Нагревают с обратным холодильником в водяной бане при температуре от 50°С до 60°С при периодическом перемешивании в течение 30 мин, охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр. Помещают бумажный фильтр, порезанный на кусочки, в круглодонную колбу с остатком, прибавляют 50 мл смеси из равных объемов метанола Р и воды Р и нагревают с обратным холодильником в водяной бане при температуре от 50°С до 60°С при периодическом перемешивании в течение 30 мин. Экстракцию повторяют дважды. К полученному фильтрату прибавляют 3,00 мл раствора внутреннего стандарта и упаривают до 18 мл при пониженном давлении. Ополаскивают круглодонную колбу водой Р и доводят до объема 20,0 мл этим же растворителем. Переносят раствор в хроматографическую колонку длиной около 0,15 м и внутренним диаметром около 30 мм, заполненную 15 г кизельгура для хроматографии Р. Оставляют на 20 мин, промывают 200 мл смеси из равных объемов этилацетата Р и метиленхлорида Р. Элюат выпаривают досуха в круглодонной колбе вместимостью 250 мл. Остаток растворяют в 10,0 мл метанола Р и прибавляют 10,0 мл воды Р. Прибавляют 7,0 г нейтрального оксида алюминия Р, встряхивают в течение 120 с, центрифугируют при 5000 g в течение 10 мин и фильтруют через бумажный фильтр. 10,0 мл фильтрата выпаривают досуха. Остаток растворяют в 3,0 мл смеси из равных объемов метанола Р и воды Р и фильтруют.
Условия хроматографирования:
- колонка из нержавеющей стали длиной 0,12 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным для хроматографии Р, с размером частиц 4 мкм;
- подвижная фаза:
- подвижная фаза А: вода Р;
- подвижная фаза В: метанол Р;

- скорость подвижной фазы: 1,2 мл/мин;
- спектрофотометрический    детектор, длина волны 225 нм;
- объем вводимой пробы: 20 мкл. Содержание суммы сесквитерпеновых лактонов в пересчете на дигидрогеленалина тиглат в процентах рассчитывают по формуле:

где:
S_LS — площадь всех пиков, соответствующих сесквитерпеновым лактонам, элюирующихся после пика сантонина на хроматограмме испытуемого раствора;
S_S — площадь пика сантонина на хроматограмме испытуемого раствора;
m — масса навески испытуемого сырья, г;
С — концентрация сантонина в растворе внутреннего стандарта, мг/мл;
V — объем раствора внутреннего стандарта, используемый для получения испытуемого раствора, мл;
1,187 — коэффициент пропорциональности для пиков дигидрогеленалина тиглата и сантонина.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.