Государственная Фармакопея (ГФ РБ) Том 2 стр. 355 Крапивы листья

КРАПИВЫ ЛИСТЬЯ
Urticae folia
NETTLE LEAF
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Собранные во время цветения высушенные цельные или измельченные листья многолетнего травянистого растения Urtica dioica L. либо Urtica urenus L. или смесь этих видов. Содержат не менее 0,3 °% суммы кофеоилмаловой и хлорогеновой кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту (С16Н18О9; М.м. 354,3) в сухом сырье или не менее 0,8 °% суммы полифенольных соединений в пересчете на пирогаллол (С6Н6О3; М.м. 126,1) в сухом сырье.

ПОДЛИННОСТЬ (ИДЕНТИФИКАЦИЯ)
Первая идентификация: А, В, С.
Вторая идентификация: А, В, D.
A. Внешние признаки (#2.8.3). Листья простые, черешковые, длиной до 20 см и шириной до 9 см (у основания), яйцевидно-ланцетовидные и широкояйцевидные, заостренные, при основании обычно сердцевидные, края остро- и крупнопильчатые с изогнутыми к верху зубцами. Поверхность листа шершавоволосистая, особенно много волосков по жилкам листа. Черешки листьев длиной 7—8 см, округлые или полуокруглые в сечении, с бороздкой на верхней стороне черешка, покрытые волосками. Цвет листьев — темно-зеленый, серовато-зеленый или коричневато-зеленый на верхней стороне и более бледный — на нижней стороне; черешков — зеленый. Запах слабый.

B. Микроскопия (#2.8.3). Видны клетки верхней эпидермы — многоугольные или слабоизвилистые, нижней — сильноизвилистые. Устьица аномоцитного типа, встречаются в основном на нижней стороне листа. В клетках эпидермы часто встречаются цистолиты в виде продолговатоокруглых образований с зернистой структурой и небольшим пятном в центре — ножкой. Волоски с обеих сторон листа трех типов: ретортовидные, жгучие и головчатые. Ретортовидные волоски одноклеточные, имеют расширенное основание и вытянутую заостренную верхушку. Жгучие волоски состоят из многоклеточного основания и крупной конечной клетки, которая оканчивается легко обламывающейся головкой. Головчатые волоски мелкие, с двух-, реже трехклеточной головкой на одноклеточной ножке. В крупных жилках расположены клетки с мелкими друзами оксалата кальция, образующими характерные цепочки.

(ЕФ) С. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. К 1 г измельченного сырья (355) прибавляют 10 мл метанола Р, кипятят с обратным холодильником в течение 15 мин, охлаждают и фильтруют. Фильтрат выпаривают в вакууме досуха при температуре не выше 40°С. Остаток растворяют в 2 мл метанола Р.
Раствор сравнения. 2 мг хлорогеновой кислоты Р и 1 мг скополетина Р растворяют в 20 мл метанола Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р.
Подвижная фаза: кислота муравьиная безводная Р — вода Р — метанол Р — этилацетат Р (2,5:4:4:50, об/об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 8 см от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление: пластинку нагревают при 100°С в течение 5 мин. Горячую пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира Р в метаноле Р.
Просматривают в ультрафиолетовом свете при 365 нм.
Результаты: ниже приведена последовательность зон хроматограмм раствора сравнения и испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора в нижней половине могут обнаруживаться флуоресцирующие зоны бледно синего или желтого цвета.

D. Тонкослойная хроматография (2.2.27).
Испытуемый раствор. 1,0 г измельченного сырья (250) встряхивают с 10 мл гексана Р в течение 3 ч и фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат выпаривают досуха при температуре не выше 45°С. Остаток растворяют в 1 мл гексана Р.
Раствор сравнения. 10 мг фитоменадиона Р растворяют в 20 мл гексана Р.
Пластинка: ТСХ пластинка со слоем силикагеля Р.
Подвижная фаза: бензол Р — петролейный эфир Р (50:50, об/об).
Наносимый объем пробы: 50 мкл испытуемого раствора и 10 мкл раствора сравнения в виде полос.

Фронт подвижной фазы: не менее 10 см от линии старта.
Высушивание: на воздухе.
Проявление: пластинку выдерживают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 365 нм в течение 10 мин. Просматривают в ультрафиоле-товом свете при 365 нм.
Результат: на хроматограмме раствора сравнения в нижней половине проявляется зона желто-зеленого цвета (фитоменадион). На хроматограмме испытуемого раствора проявляется желто-зеленая зона, соответствующая зоне фитоменадиона на хроматограмме испытуемого раствора. На хроматограмме испытуемого раствора могут обнаруживаться и другие зоны.

ИСПЫТАНИЯ (ЧИСЛОВЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ)
Допустимые примеси (#2.8.2). Несырьевые части растения: другие части растения — не более 5 %; почерневшие и побуревшие части растения — не более 5 %. Органические примеси: не более 2 %. Минеральные примеси: не более 1 %.

Потеря в массе при высушивании (2.2.32). Не более 14,0 %. 2,000 г измельченного сырья (2000) сушат при температуре от 100°С до 105°С.

(ЕФ) :Общая зола (2.4.16). Не более 20,0%.

(ЕФ):Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте (2.8.1). Не более 4,0 %.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ (ЕФ)
Определение содержания суммы кофеоилмаловой и хлорогеновой кислот. Жидкостная хроматография (2.2.29).
Раствор внутреннего стандарта. 20,0 мг п-кумаровой кислоты Р растворяют в 40 % (об/об) метаноле Р и доводят до объема 200,0 мл этим же растворителем.
Испытуемый раствор. К 0,200 г измельченного сырья (355) прибавляют 25,0 мл растворавнутреннего стандарта, выдерживают в ультразвуковой бане при температуре 40°С в течение 30 мин и фильтруют.
Раствор сравнения. 10,0 мг ФСО хлорогеновой кислоты растворяют в 100,0 мл раствора внутреннего стандарта.
Условия хроматографирования:
- предколонка длиной 4 мм и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным эндкепированным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- колонка длиной 0,125 м и внутренним диаметром 4 мм, заполненная силикагелем октадецилсилильным эндкепированным для хроматографии Р с размером частиц 5 мкм;
- температура: 25°С;
- подвижная фаза:
- подвижная фаза А: метанол Р — вода
Р, доведенная кислотой фосфорной разведенной Р до рН 2,0 (15:85, об/об);
- подвижная фаза В: метанол Р.

- скорость подвижной фазы: 1 мл/мин;
- спектрофотометрический детектор, длина волны 330 нм;
- объем вводимой пробы: 20 мкл.
Относительные времена удерживания (по отношению к п-кумаровой кислоте, время удерживания около 24 мин): хлорогеновая кислота — около 0,53; кофеоилмаловая кислота — около 1,19.
Содержание хлорогеновой кислоты (СА) или кофеоилмаловой кислоты (СВ) в процентах рассчитывают по формуле:

где:
S1 — площадь пика хлорогеновой кислоты или кофеоилмаловой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S2 — площадь пика хлорогеновой кислоты на хроматограмме раствора сравнения;
S3 — площадь пика п-кумаровой кислоты на хроматограмме испытуемого раствора;
S4 — площадь пика п-кумаровой кислоты на хроматограмме раствора сравнения;
m — масса навески испытуемого сырья, мг;
С — содержание хлорогеновой кислоты в растворе сравнения, мг/мл.
Общее содержание кислот рассчитывают по формуле СА+СВ
Определение содержания суммы полифенольных соединений.
Испытуемый раствор. 2,500 г измельченного сырья (500) помещают в круглодонную колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл кипящей воды Р, нагревают с обратным холодильником в водяной бане в течение 15 мин. Затем колбу охлаждают при комнатной температуре в течение 45 мин, содержимое количественно переносят в мерную колбу и доводят водой Р до объема 250,0 мл. Выдерживают до оседания частиц и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 50 мл фильтрата. 5,0 мл полученного фильтрата разводят водой Р до объема 25,0 мл. К 2.0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл реактива фосфорномолибденово-вольфрамового Р, 10,0 мл воды Р и доводят раствором 290 г/л натрия карбоната Р в воде Р до объема 25,0 мл.
Раствор сравнения. 50,0 мг пирогаллола Р растворяют в воде Р и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем. 5,0 мл полученного раствора разводят водой Р до объема 100,0 мл. К 2,0 мл полученного раствора прибавляют 1,0 мл реактива фосфорномолибденово-вольфрамового Р, 10.0 мл воды и доводят  раствором 290 г/л натрия карбоната Р в воде Р до объема 25,0 мл.
Через 30 мин измеряют оптическую плотность (2.2.25) растворов при 760 нм, используя воду Р в качестве компенсационного раствора.
Содержание суммы полифенольных соединений в пересчете на пирогаллол в процентах рассчитывают по формуле:

где:
А₁ — оптическая плотность испытуемого раствора;
А₂ — оптическая плотность раствора сравнения;
m₁ — масса навески испытуемого сырья, г;
m₂ — масса навески пирогаллола Р, г.

ХРАНЕНИЕ
В защищенном от влаги и света месте при температуре от 15°С до 25°С.